Терапевт - главная ›› Желудочно-кишечные болезни ›› Лабораторная диагностика псевдомембранозного колита
Лабораторная диагностика псевдомембранозного колита
Лабораторная диагностика C. difficile основывается либо на обнаружении токсинов C. difficile, либо на обнаружении токсигенных клостридий. В настоящее время используются следующие лабораторные тесты:
- ПЦР
- ИФА на глютамат дегидрогеназу (ГД)
- ИФА на клостридиальные токсины А и Б
- Посев с регистрацией цитотоксичности
- Селективный посев кала на анаэробы
ПЦР, обнаруживающая гены токсинов А и Б, является высокоспецифичным и высокочувствительным тестом. Чувствительность ПЦР выше, чем у ИФА и сравнима с чувствительностью посева на цитотоксичность. Кроме того, результаты ПЦР могут быть получены через 1 час после начала постановки.
ИФА на ГД.. Глютамат дегидрогеназа – эссенциальный фермент всех C. difficile, его синтезируют как токсигенные, так и нетоксигенные штаммы, поэтому ИФА на ГД может служить только скриннинговым тестом, положительный результат требует проведения более специфичных анализов, например, ПЦР на гены токсинов. ИФА на ГД обладает высокой чувствительностью и не требует много времени на постановку.
ИФА на токсины C. difficile А и Б. Большинство штаммов C. difficile выделяют оба токсина, однако некоторые штаммы синтезируют только один из них. Чувствительность ИФА на токсины составляет примерно 75%, специфичность достигает 99%. Высокий процент ложноотрицательных результатов объясняется тем, что тест становится положительным, только если в образце кала присутствует достаточно большое количество токсина 100-1000 пикограмм. Данный тест стоит недорого и делается относительно быстро - получение результатов требует обычно нескольких часов.
Если первый тест ИФА на токсины даёт отрицательный результат, повторять его нецелесообразно. В трёх исследованиях было показано, что повторение теста позволяет выявить дополнительно 10% случаев псевдомембранозного колита, в двух других исследований процент дополнительно выявленных случаев был выше – 19-20%.
Посев с регистрацией цитотоксичности. Данный тест является «золотым стандартом» диагностики, поэтому с ним сравнивают все остальные тесты. Проводится он следующим образом: обработанный образец кала (разведённый, фильтрованный и с добавленным буфером) наносят на монослой культивируемых клеток. Если в кале есть токсин C. difficile, он оказывает цитотоксическое действие, что приводит к округление фибробластов в клеточной культуре. Данный тест обладает большей чувствительностью, чем иммуноферментые анализы, но более трудоёмок и требует минимум двух дней для получения результатов.
Проводилось исследование по сравнению ПЦР («Cepheid Xpert») с посевом на цитотоксичность, было показано, что чувствительность и специфичность данного теста составила 97% и 93% соответственно. При использовании ПЦР-риботипирования как референсного теста для гипервирулентного штамма 027 чувствительность и специфичность теста составила 100% и 98,1% соответственно. Ложноотрицательные результаты ПЦР встречаются при долгом хранении образца перед анализом, и у больных, уже находящихся на противоклостридиальном лечении.
- Селективный посев кала на анаэробы. Посев на селективную среду с тестированием выделенных клостридий на синтез токсинов является самым чувствительным методом диагностики. Данный метод используется в эпидемиологических исследованиях, но редко применяется в клинической практике из-за трудоёмкости и долгого ожидания результатов.
Для рациональной диагностики псевдомембранозного колита было разработано несколько диагностических алгоритмов.
Обычно на первом этапе используют оба ИФА метода – ИФА на ГД и ИФА на токсины, если оба ИФА теста дают отрицательный результат, можно заключить, что псевдомембранозного колита нет. Положительный результат ИФА на ГД и отрицательный результат ИФА на токсины требует проведения ПЦР исследования.
Учитывая высокую чувствительность и специфичность ПЦР на гены токсинов, данный метод можно использовать как единственный – без предварительного выполнения ИФА методов.
Повторные анализы для подтверждения излечения не показаны.
comments powered by Disqus